Диагностический справочник иммунолога

избытка аутоантител может сопровождаться эмбриотоксическим и эмбриоцидным эффектами.

Ход развития эмбриона регулируют аутоантитела к белкам S-100, MP-65.

Аутоантитела к белку S-100 участвуют в регуляции гибели клеток развивающегося плода, а также в регуляции созревания нейробластов.

Антитела к белку МР-65 принимают участие в регуляции процессов морфогенеза и созревания различных органов. Недостаток продукции и поступления аутоантител к белкам S-100 и МР-65 может привести к возникновению пороков развития и даже гибели плода.

Подъем продукции аутоантител к белкам S-100 увеличивает риск остановки беременности и десятикратно повышает риск развития патологии нервной системы плода.

Часто длительное нарушение продукции аутоантител приводит к невынашиванию беременности, нарушению в закладке органов плода, бесплодию.

ЭЛИ-СПР-тест проводится у женщин, которым долгое время не удается забеременеть.

Он выявляет и оценивает содержание антиспермальных аутоантител, направленных к мембранным белкам сперматозоидов человека. При избытке последних происходит снижение фертильности.

Преимущества метода иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ является иммунохимическим методом и применяется с диагностической целью. Использование этого метода включает в себя проведение следующих этапов:

1. Производится сорбция на твердую основу антигена для выявления антител к нему (в лунки полистеронового ИФА планиата).

2. Вносится антиген в лунки биопроб, в которых выявляются специфические антитела.

3. Производится инкубация системы, во время которой происходят специфические взаимодействия антител и антигена на твердой основе.

4. Производится инкубация системы в течение определенного времени после внесения в систему раствора фермента, молекулы которого конъюгированы с антивидовыми антииммуноглобулинами;

5. В систему вносится хромогенный субстрат, разлагающийся под действием фермента с антивидовыми антителами;

6. Происходит образование окрашенного продукта, этот процесс выявляется фотометрически или визуально. Метод твердофазового неконкурентно-иммуноферментного анализа, лежащего в основе методов группы ЭЛИ-тест, обладает следующими преимуществами:

1) возможностью использовать минимум исследуемого материала;

2) высокой чувствительностью;

3) стабильностью реагентов;

4) возможностью автоматизации.

Применяются и другие иммунологические методы диагностики: встречный иммуноэлектрофорез (ВИЭФ), радиоиммунный анализ (РИА) и др.

Определение антител к определенным классам иммуноглобулинов (JgM, JgG, JgA и др.) дает возможность дифференцировать заболевание с другими иммунными заболеваниями.

Глава 7 Оценка иммунного статуса

Иммунный статус организма представляет собой количественную и качественную характеристику составных частей иммунной системы на определенном этапе развития организма или определенной стадии развития заболевания. Очень часто эффективность работы иммунной системы сопряжена с уровнем сопряженности ее компонентов.

При наличии дефектов звеньев иммунной системы может произойти компенсация возникших дефектов или нарушение функций иммунной системы с возникновением различных заболеваний.

При заболеваниях, связанных с повреждениями иммунной системы, существует необходимость оценки иммунного статуса, потребность идентифицировать нарушенное звено иммунитета для выбора метода лечения, оценки его эффективности и подбора адекватного лечения. Существует несколько вариантов оценки иммунного статуса.

При двухэтапном варианте методики на первом этапе выявляют грубые дефекты фагоцитоза, клеточного и гуморального иммунитета. Для этого определяют абсолютное и относительное содержание лимфоцитов периферической крови; Т– и В-лимфоциты, основные классы иммуноглобулинов, фагоцитарную активность.

На втором этапе проводятся аналитические тесты с включением методик определения функциональной активности фагоцитов, естественных киллеров, Т– и В-клеток.

В последующем была введена трехэтапная оценка иммунного статуса.

На первом этапе определяются количество и морфология лимфоцитов, уровень иммуноглобулинов, производятся кожные тесты, проводится рентгенологическое обследование органов лимфатической системы.

На втором этапе проводится гистохимический анализ лимфоидных органов в проточном цитометре с использованием моноклональных антител, а также анализ цитотоксичности поверхностных маркеров мононуклеарных клеток. Третий этап включает в себя:

1) определение активности ферментов;

2) определение гормонов вилочковой железы;

3) анализ фагоцитов;

4) определение компонентов системы комплемента;

5) выявление иммунопродуцирующих фракций В- лимфоцитов;

6) проведение анализа генетических и хромосомных данных. Наиболее информативными считаются данные иммунологического обследования:

– количественная и качественная оценка иммуноглобулинов, иммунных комплексов;

– определение цитокинов;

– определение компонента комплемента;

– определение белков.

Кроме этого проводятся клеточные исследования, включающие в себя определение:

– субпопуляций лимфоцитов;

– клональности лимфоидных клеток;

– продукции иммуноглобулинов;

– функции активности лимфоцитов, тучных клеток, эозинофилов.

В последние годы широко применяется оценка В-звена иммунитета, способность В-лимфоцитов синтезировать иммуноглобулины, проводится оценка способности Т- лимфоцитов продуцировать цитокины, влияющие на макрофаги, НК-клетки.

Материалом для исследования служит сыворотка крови и клетки периферической крови. По показаниям проводятся исследования костного мозга и лимфатической системы.

В различные возрастные периоды иммунологические показатели и показатели нормального уровня лейкоцитов отличаются (табл. 4– 5).

Таблица 4. Нормальное содержание лейкоцитов

Примечание. М – среднее значение; интервал – центральный диапазон; % – доля от числа белых клеток.

Таблица 5. Нормальные иммунологические показатели (из Nelson Textbok, 2003)

Схема исследования клеточного и гуморального иммунитета, факторов неспецифической защиты (табл. 6–8):

1. Исследование венозной крови (лейкоцитограмма).

2. Идентификация Т– и В-лимфоцитов методом непрямой иммунофлюоресценции в сыворотке крови.

3. Исследование методом радиальной иммунодиффузии иммуноглобулинов сыворотки крови (по методу Манчини).

4. Исследование циркулирующих иммунных комплексов осаждением в полиэтиленшкале.

5. Оценка активности фагоцитов путем определения фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа.

Таблица 6. Показатели клеточного звена иммунитета в возрасте 30–50 лет

Таблица 7. Показатели гуморального звена иммунитета в возрасте 30–50 лет

Таблица 8. Фагоцитарная активность полиморфноядерных лейкоцитов у здоровых лиц в возрасте 30–50 лет

Примечание. Фагоцитарный индекс представляет собой процент клеток, вступивших в фагоцитоз, к их общему числу. Фагоцитарное число – среднее содержание фагоцитированных частиц в одной нейтрофильной грануле.

Часть II Болезни и расстройства иммунной системы

Глава 1 Гемолитические иммунные анемии

Гемолитические иммунные анемии возникают в результате участия антител в повреждении и преждевременной гибели эритроцитов. Антитела могут поступать извне при гемолитической болезни новорожденных, появляться после приема лекарственных препаратов, в результате бактериальных или вирусных воздействий. Антитела могут также вырабатываться против собственных неизменных эритроцитов в результате срыва иммунологических процессов.

Гемолитическая болезнь новорожденных

Гемолитическая болезнь новорожденных возникает вследствие несовместимости крови матери и плода по резус-фактору или группе крови. Болезнь развивается в тех случаях, когда во внутриутробном периоде развития эритроциты плода, попадая в организм матери, вызывают выработку антител против эритроцитов плода. Выработанные антитела, попадая в кровь плода, приводят к разрушению эритроцитов ребенка, вызывая гемолиз, развитие тяжелой гемолитической анемии.

Печень больного ребенка не может вывести из организма продукты распада эритроцитов. В результате возникают нарушения обменных процессов, что приводит к